恒奥德仪器紫外分析仪的原理及其应用

紫外分析仪是荧光术的应用，荧光术是什么呢? 了解下什么是荧光，荧光又作"萤光"，是种光致发光的冷发光现象。当某种常温物质经某种波长的入射光(通常是紫外线或X射线)照射，吸收光能后入激发态，并且立即退激发并发出比入射光的的波长长的出射光(通常波长在可见光波段);而且旦停止入射光，发光现象也随之立即消失。具有这种性质的出射光就被称之为荧光。 知道了什么是荧光，顾名思义就能想到什么是荧光术。荧光术是某些物质受定波长的光激发后，在短时间内(10-8秒)会发射出波长大于激发波长的光，这种光称为荧光。这发光现象在各方面的应用及有关的方法称为荧光术(fluorescent technique)。

物质经过紫外线照射后发出荧光的现象可分为两种情况，，如叶绿素、血红素等经紫外线照射后，能发出红色的荧光，称为自发荧光;二种是诱发荧光，即物体经荧光染料染色后再通过紫外线照射发出荧光，称为诱发荧光。

荧光术在生物化学及分子生物学研究中应用主要包括以下几个方面:

1、物质的定性:不同的荧光物质有不同的激发光谱和发射光谱，因此可用荧光行物质的鉴别。与吸收光谱法相比，荧光法具有更的选择性。

2、定量测定:利用在较低浓度下荧光强度与样品浓度成正比这关系可以定量分析样品中荧光组分的含量，常用于测定氨基酸、蛋白质、核酸的含量。荧光定量测定的个优点是灵敏度，例如维生素B2的测定*可达1毫微克/毫升，这优点使测定时所需要样品量大大减少。 这种定量测定方法还可应用于酶催化的反应，只要反应前后有荧光强度的变化，就可用来测定酶的含量及酶反应的速率等。

3、研究生物大分子的物理化学特性及其分子的结构和构象:荧光的激发光谱、发射光谱、量子产率和荧光寿命等参数不仅和分子内荧光发色基团的本身结构有关，而且还强烈地依赖于发色团周围的环境，即对周围环境十分敏感。利用此特点可通过测定上述有关荧光参数的变化来研究荧光发色团所在位的微环境的特征及其变化。在此研究中，除了利用生物大分子本身具有的荧光发色团(如色氨酸、酪氨酸、鸟苷酸等，此类荧光称为内源荧光)以外，可将些特殊的荧光染料分子共价地结合或吸附在生物大分子的某位，通过测定该染料分子的荧光特性变化来研究生物大分子，这种染料分子被称为"荧光探针"，它们发出的荧光般称为外源荧光。荧光探针的应用，大大地开拓了荧光术在分子生物学中的应用范围。

4、利用荧光寿命、量子产率等参数可以研究生物大分子中的能量转移现象:通过该现象的研究，可以获得生物大分子内的许多信息。

以往人们常用荧光偏振做标来研究生物大分子动力学。人们趋于用荧光偏振随时间的衰减来研究这些问题。在这种方法中，激发光不是连续的面偏振光，而是偏振的光脉冲，因此测得的F∥和F是在两个不同方向上偏振的荧光随时间的衰减，它既和荧光寿命τ有关，又与分子在溶液中的运动有关，因此常表示为F∥(t)和F⊥(t)。由它们可得相当重要的物理量--各向异性参数A(t)。由A(t)可推测生物大分子的形状、分子转动弛豫时间(即从个定向的状态到个无定向状态所要的时间)，而可以推知生物大分子的大小、分子在溶液中的转动角度和时间之间的函数关系。由这些结果可以研究分子之间的相互作用、分子间结合的紧密程度、蛋白质、核酸分子的解聚程度等等。